L'objectif de mon travail de thèse a été de mettre au point une méthode de transformation génique par Agrobacterium tumefaciens (agrotransformation) du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindrosporum en vue de caractériser la fonction des gènes utilisés. Les gènes cibles sont le transporteur de zinc HcZnT1 d'H. cylindrosporum, la thiorédoxine PiTrx et la métallothionéine PiMt1, du champignon Paxillus involutus. La méthode de l'agrotransformation, dont la mise en oeuvre est relativement facile par rapport aux autres méthodes de transformation, s'est avérée efficace et il était possible d'obtenir des transformants stables avec des taux de transformation reproductibles. Le clonage des gènes dans le plasmide pFAT3 s'est montré plus favorable pour réaliser la transformation que les autres vecteurs binaires testés (pBGgHg, pBINplus) qui ne pouvaient pas être utilisés pour cloner les gènes. Pour chaque gène il était possible de recueillir des transformants stables contenant le transgène. L'analyse par RT-PCR des transcrits révèle que les transgènes sont effectivement exprimés. L'analyse phénotypique a fait apparaître que gène PiMt1 est capable d'accroître la capacité de tolérance d'H. cylindrosporum vis-à-vis du cuivre, mais non des autres métaux testés (Zn, Cd, Ni).